DESIGN E PADRONIZAÇÃO DO PRIMER PARA A VARIANTE RS4240157 DO GENE ECA2 EM PACIENTES COM E SEM SARS-COV-2

INTRODUÇÃO: A pandemia de Covid-19 causada por uma nova cepa do coronavírus, a SARS-CoV-2, tornou-se uma emergência de saúde pública a partir do ano de 2020, com milhões de infectados e de mortes, os quais assolaram e preocuparam o mundo inteiro. Sabe-se que a enzima conversora de angiotensina 2 (ECA2) é a principal via receptora da infecção por SARS-CoV-2 e é expressa em diferentes áreas e aparelhos sistémicos do corpo humano. Ela atua como um receptor para a proteína estrutural S (espícula) do SARS-CoV-2, permitindo que o vírus entre nas células hospedeiras. Dessa forma, o entendimento da relação entre a variante rs4240157 do gene ECA2 e o sistema imune humano tornou-se fundamental para compreender a manifestação, a evolução e o prognóstico desfavorável da doença em gestantes infectadas pela SARS-CoV2 e em seus filhos. Diversos estudos têm abordado essa relação, afinal tal variante é um fator que afeta a gravidade da doença. OBJETIVOS: O objetivo, então, foi elaborar, otimizar e padronizar um protocolo para o design do primer da variante rs4240157 do gene ECA2, pelo método de PCR alelo específico (do inglês, AS-PCR), em amostras de sangue periférico de gestantes que contraíram Covid-19. MATERIAIS E MÉTODO: A busca e identificação da sequência específica de DNA foi realizada através de buscas em bases de dados genéticos, utilizando a página eletrônica do GenBank do NCBI. A busca envolveu o descritor “ECA2” e a identificação das sequências de éxons e introns. Posteriormente houve a seleção das sequências de interesse e a avaliação dos possíveis tipos de transcritos para o mesmo gene. RESULTADOS: realizamos o design de primer e identificação de uma enzima de restrição para utilizar a técnica QRT-PCR em conjunto com a RFLP para análise em eletroforese em gel de agarose. no sentido de identificar os dois tipos de alelos, foi desenhada uma opção de primer senso para amplificação do alelo T da variante. Assim a reação de PCR alelo específica foi capaz de (A) amplificar o alelo C, usando os primers forward C e reverse, e (B) amplificar o alelo T, usando os primers forward T e reverse. Par de primers 1(Primer Forward C: CCCCTGAACACTATTTACCAACC ; Primer Reverse: AGTCTCGGCAGATCAGGATA ) Par de primers 2 (Primer Forward T: TCCCTGAACACTATTTACCAACC ; Primer Reverse: AGTCTCGGCAGATCAGGATA ) CONSIDERAÇÕES FINAIS: Este estudo pode fornecer informações relevantes a respeito do tema, ao contribuir e facilitar estudos futuros, no que tange a elaboração de primers, seleção desses e testagem, a fim de que haja uma sequência base para que os estudos progridam com mais facilidade e praticidade.

PALAVRAS-CHAVE: 1. SARS-CoV-2; 2. Covid-19; 3. Gene ECA2; 4. Variante rs4240157; 5. Gestante.