PADRONIZAÇÃO DA TÉCNICA QRT-PCR COM SYBR®GREEN PARA AS VARIANTES RS 2285666 E RS 4240157 DO GENE ECA2 ENVOLVIDAS NA INFECÇÃO POR SARS-COV-2

INTRODUÇÃO: A pandemia de SARS-CoV-2 desencadeou uma intensa investigação científica sobre os mecanismos de infecção viral, destacando a interação entre a proteína Spike e a ECA2. Conforme evidenciado na literatura científica, a infecção pelo SARS-CoV-2 é mediada pela interação da proteína Spike (S) com a enzima conversora de angiotensina II (ECA2), presente na membrana celular humana. A distribuição da ECA2 acontece em diversos tecidos, como mucosa oral, sistema respiratório e células cardíacas, e desempenha um papel crucial na degradação da angiotensina II em angiotensina 1-7, fato que promove vasodilatação. A análise dos polimorfismos rs2285666 e rs4240157 do gene ECA2, usando qRT-PCR, visa entender sua relação com a gravidade da doença em gestantes infectadas. A qRT-PCR permite a detecção e quantificação precisa dessas variantes, sendo crucial para verificar se elas aumentam a suscetibilidade à infecção e a manifestação de sintomas severos, potencialmente influenciando os desfechos clínicos. OBJETIVOS: O objetivo deste estudo é otimizar e padronizar a técnica de qRT-PCR para a detecção das variantes rs2285666 e rs4240157 do gene da enzima conversora de angiotensina II (ECA2). MATERIAIS E MÉTODO: A extração de DNA a partir de sangue periférico dos participantes foi seguida por tratamento com TRIzol-LS e quantificação por espectrofotometria (260/280) usando o NanoDrop 2000c. Após desenhar e receber os primers, foram calculados volumes e diluições, além de determinar as temperaturas de melting (Tm) e annealing (Ta) para otimizar as condições da reação e testar a sensibilidade da técnica. RESULTADOS: A eletroforese confirmou o sucesso da qRT-PCR, mostrando bandas claras e bem definidas nos tamanhos esperados, indicando amplificação eficiente e específica. A ausência de bandas inespecíficas reforça a precisão dos primers e a otimização da reação. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Diante dos dois protocolos otimizados da qRT-PCR, e a partir do resultado da eletroforese, será possível fornecer informações valiosas para correlacionar a presença de uma determinada variante ao status clínico das gestantes infectadas e seus respectivos bebês.

PALAVRAS-CHAVE: 1. SARS-CoV-2; 2. rs2285666; 3. rs4240157; 4. qRT-PCR.