DESIGN E PADRONIZAÇÃO DE REAÇÃO DE QUANTIFICAÇÃO DA EXPRESSÃO GÊNICA POR MÉTODO SYBR®GREEN EM SISTEMA DE PCR EM TEMPO REAL (QRT-PCR) PARA O GENE DO INTERFERON BETA 1 (IFNB1)

INTRODUÇÃO: O desenvolvimento do SNC é complexo e envolve interações genéticas, ambientais e bioquímicas. Lesões cerebrais neonatais, como a encefalopatia neonatal (NE), têm inflamação e hipóxia-isquemia como fatores críticos. Os interferons do tipo I (IFNα/β) desempenham papéis importantes, restringindo a replicação viral e regulando respostas imunes. OBJETIVOS: O objetivo geral do estudo é propor o desenho e a padronização de um protocolo para a análise da expressão gênica do IFNB1 em mulheres gestantes infectadas pelo COVID-19. Objetivos específicos incluem obter amostras de sangue, desenhar oligonucleotídeos para PCR quantitativo, avaliar oligonucleotídeos usando bioinformática, e padronizar a reação para análise da expressão gênica. MATERIAIS E MÉTODO: A metodologia inclui a extração de RNA de amostras de sangue, identificação da sequência do gene IFNB1, desenho de primers, análise in silico dos fragmentos amplificados, síntese de DNA complementar, padronização da qRT-PCR, e análise da curva padrão. Foram seguidos protocolos éticos aprovados pela Comissão Nacional de Ética em Pesquisa. RESULTADOS: Os resultados indicam que o gene IFNB1 influencia o desenvolvimento neural modulando a resposta imune e inflamação no cérebro. A expressão gênica do IFNB1 foi avaliada por qRT-PCR, mostrando variações significativas entre amostras, refletindo diferentes níveis de regulação e atividade biológica do gene. A análise confirmou a alta homologia e identidade dos primers com as sequências dos genes de interesse, e a variação nos valores de ΔCt evidencia diferenças na expressão do gene IFNB1, associada à resposta imunológica e defesa antiviral. CONSIDERAÇÕES FINAIS: O estudo revelou que o gene IFNB1 é crucial na modulação da resposta imune e inflamatória cerebral, afetando o desenvolvimento neural, especialmente em gestantes infectadas por COVID-19. Experimentos de qRT-PCR mostraram variações na expressão do IFNB1, influenciadas por fatores celulares, tratamentos e diferenças genéticas, refletindo a heterogeneidade na regulação e atividade biológica do gene. Essa variabilidade pode impactar a resposta imune e os desfechos da infecção por SARS-CoV-2. A análise do IFNB1 é relevante para entender a correlação entre infecção viral e neurodesenvolvimento.

PALAVRAS-CHAVE: Neurodesenvolvimento; IFNB1; COVID-19; Expressão gênica; Resposta imune​