DESIGN DE PRIMERS PARA ANÁLISE DA EXPRESSÃO GÊNICA COM USO DA BIOINFORMÁTICA

INTRODUÇÃO: A migrânea é uma fisiopatologia decorrente de uma anomalia pertencente ao nervo trigêmeo que provoca uma reação neuro-inflamatória nos portadores dessa doença. A Interleucina-1 beta (IL-1B) é uma citocina que atua na região do hipotálamo e promove a liberação de neurotransmissores mediadores de resposta neuroendócrina às inflamações, formando corticoides que atuam como reguladores em períodos inflamatórios, como ocorre em crises de migrânea. OBJETIVOS: avaliar, identificar e desenvolver um primer para interagir com o gene IL1B, a fim de protocolar a análise da expressão gênica, auxiliar no diagnóstico dessa fisiopatologia e delimitar estratégias terapêuticas para o tratamento dos casos. MATERIAIS E MÉTODO: Foi feita a análise das regiões alvo da IL1B, a partir da utilização de métodos de extração PCR e a qRT-PCR, utilizando a metodologia PCR em tempo real (qRT-PCR) baseados em SYBR®Green. RESULTADOS: Foram preparadas diluições do DNAc (puro, 1:2, 1:5 e 1:10) e as análises ocorreram em duplicata. A diluição de DNAc que apresentou o Ct entre os valores de CTs 18 a 22 foi de 1:2. A análise da curva de melting foi realizada no final da reação para verificar artefatos como dímeros de primers e contaminação. Pode-se observar que em nenhum caso, tanto para o gene alvo quanto para o constitutivo houve detecção de picos adicionais na análise da curva de melting, evidenciando uma alta homologia e identidade dos primers desenhados com a sequência correspondente aos genes. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Por fim, após a análise de 4 amostras distintas, a concentração de entrada do RNA total (300ng/uL, a diluição 1:2 do DNAc, a diluição e concentração dos primers na reação, e a análise do gene alvo podem ser utilizados como padrão nas pesquisas de expressão gênica relativa através da técnica de SYBR®Green. Análise do gene alvo pode ser utilizada como padrão nas pesquisas de expressão gênica relativa através da técnica de SYBR®Green.

PALAVRAS-CHAVE: Migrânea; Reação em Cadeia da Polimerase; IL1B.