DESIGN E PADRONIZAÇÃO DA QUANTIFICAÇÃO DE EXPRESSÃO GÊNICA DO GENE INFY

INTRODUÇÃO: A migrânea é um tipo de cefaleia primária de alta prevalência na população, afeta mais mulheres e é uma das maiores causas de incapacidades. Pode ser caracterizada por dor unilateral, pulsátil, de forte a moderada intensidade, acompanhada de náusea, vômito, fotofobia e fonofobia. Sua fisiopatologia não é completamente elucidada, sabe-se que cada fase possui alguns mecanismos já identificados. Durante o pródromo destaca-se a ativação hipotalâmica gerando sintomas vegetativos, estes precedem a aura, que nem sempre está presente e parece possuir relação com o fenômeno da depressão alastrante. Este mecanismo gera a ativação do sistema trigêminovascular, um dos pontos chave descritos como causadores da doença, além da liberação de peptídeo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP) e outras citocinas inflamatórias, importantes no desencadeamento e perpetuação da dor. Além disso, sabe-se que a ativação dessas vias sinalizadoras gera um quadro de inflamação neurogênica. Diante disso, as moléculas sinalizadoras envolvidas na patogênese da doença tornaram-se interesse de estudo e potenciais alvos terapêuticos. Por sua vez, o gene do IFNY apresenta-se em alguns estudos com expressão elevada em pacientes com migrânea e demonstra ter relação com o fenômeno da depressão alastrante e a ocorrência de aura. OBJETIVOS: Este trabalho tem como objetivo o desenvolvimento e padronização de sequências de primers que foram utilizados na reação de PCR em tempo real pela técnica SYBR®Green. MATERIAIS E MÉTODO: Foram construídas 5 sequências de opligonucleotídeos para o gene IFNY a partir de sequência de genoma depositada no Genbank (NCBI). Realizado um alinhamento utilizando o algoritimo Clustal W, mapeadas as regiões conservadas e selecionado os primers. Posteriormente submetidos à análise dos parâmetros especificidade, pela ferramenta BLAST, concentração de GC%, TMelting, comprimento, formação de dímeros e hairpin utilizando o software Oligo Analyser, validando-os para uso in vitro. RESULTADOS: Foi utilizada a concentração de entrada do RNA total de 300ng/uL e após a análise de 4 amostras distintas a diluição 1:2 do DNAc foi utilizada para a análise da expressão do gene alvo IFNY. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Os parâmetros usados podem ser empregados como padrão em pesquisas de expressão gênica relativa ao gene alvo IFNY através da técnica de SYBR®Green.

PALAVRAS-CHAVE: Migrânea; Interferon gama; Reação em Cadeia de Polimerase.