DESIGN E PADRONIZAÇÃO DA QUANTIFICAÇÃO DE EXPRESSÃO GÊNICA PARA O GENE IL6 POR QRT-PCR BASEADO EM SYBR®GREEN PARA ESTUDOS EM PACIENTES COM MIGRÂNEA

INTRODUÇÃO: A enxaqueca é uma doença neurológica crônica responsável por alta incapacidade dos pacientes, gerando dor pulsátil, geralmente unilateral, de moderada a forte intensidade. Os mecanismos fisiopatológicos da migrânea ainda não foram completamente elucidados, contudo, sabe-se que é uma doença de desordem complexa do sistema nervoso, associado a vasodilatação e a alterações inflamatórias. As alterações inflamatórias estão relacionadas com inflamação neurogênica, causada pela liberação de neuropeptídios, com participação efetiva de muitas interleucinas. A Interleucina 6 (IL-6) é um dos mediadores desse processo, assim, a análise da sua expressão gênica, feita por qRT-PCR, tem grande importância para melhor entendimento e possíveis avanços no diagnóstico e tratamento dessa doença. OBJETIVOS: Esse trabalho teve como objetivo desenvolvimento de primers e padronização de análises de expressão gênica do gene IL6 utilizando SYBR®Green. MATERIAIS E MÉTODO: A primeira etapa do estudo foi caracterização estrutural do gene IL e regiões alvo para o desenho de primers em banco de dados (GenBank), seguido do desenho dos primers (Forward e Reverse), avaliação da especificidade (BLAST), estudo de estruturas secundárias entre os primers (DINAmelt) e amplicons (Mfold). Após as análises in silico, as sequências foram confeccionadas e testadas, com a padronização da reação de qRT-PCR. RESULTADOS: Foram desenhadas 3 pares de sequências de primers, sendo o par 1 escolhido. O par selecionado possui percentual de G/C de 45%, TM entre 55.24 e 54.98 °C e tamanho de fragmento de 97 pb. Análises in silico confirmaram a especificidade dos primers, bem como ausência de formação de estruturas secundárias. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Após a padronização da reação e análise das curvas padrões foi possível identificar os primers confeccionados no presente estudo permitiram a realização de análises de expressão gênica, podendo ser empregados em larga escala, a custo reduzido em estudos futuros.

PALAVRAS-CHAVE: SYBR®Green; interleucina-6; qRT-PCR; desenho de primers.