DESIGN E OTIMIZAÇÃO DA QUANTIFICAÇÃO DE EXPRESSÃO GÊNICA DO CGRP POR QRT-PCR BASEADO EM SYBR®GREEN PARA ESTUDOS EM PACIENTES COM MIGRÂNEA

INTRODUÇÃO: A migrânea, doença de alta prevalência, afeta cerca de um sexto da população mundial e predominantemente o sexo feminino. Sua principal manifestação é uma cefaleia moderada a forte, unilateral, pulsátil e incapacitante. Sobre o mecanismo fisiopatológico da dor, o peptídeo relacionado ao gene da calcitonina (do inglês calcitonin gene related peptide – CGRP) apresenta um papel importante. O gânglio trigeminal é ativado, liberando o CGRP em terminações nervosas do tipo C, o que acarreta uma cascata de inflamação neurogênica, a qual envolve o recrutamento de neutrófilos, linfócitos e uma maior sensibilização de nociceptores. Há estudos que demonstraram níveis elevados de CGRP durante episódios de enxaqueca. Desse modo, a associação entre o CGRP e a fisiopatologia da enxaqueca revelam que esse neuropeptídeo configura um importante alvo no tratamento dessa doença. OBJETIVOS: Nesse contexto, o presente trabalho teve por foco a padronização da técnica de análise da expressão gênica do CGRP por reação em cadeia da polimerase (PCR) quantitativa (qRT-PCR), utilizando ferramentas de bioinformática que propiciem uma resposta com sensibilidade e precisão dos níveis deste biomarcador. MATERIAIS E MÉTODO: Após as avaliações in sílico sobre a sequência e as características dos primers, um par destes foi enviado para a síntese, o qual era capaz de amplificar quaisquer transcritos variantes do CGRP. Em seguida, foi realizada eluição dos primers, a testagem do perfil de amplificação, a possível formação de estruturas secundárias e a análise da expressão de CGRP no sangue periférico de pacientes do projeto de cefaleias. RESULTADOS: O par de primer selecionado mostrou ausência de homologia com outras sequências gênicas humanas, temperatura de melting ideal para a análise de expressão comparativa com o gene constitutivo, único pico na análise da curva de dissociação mostrando a habilidade de amplificar somente o alvo CGRP, e por fim, permitiu a avaliação da expressão gênica do CGRP em amostras de pacientes do projeto. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Neste projeto de caráter inovador, foi desenvolvido um protocolo para análise da expressão gênica de CGRP com possibilidade de aplicação para o estudo de biomarcadores da doença migranosa, e ainda, permitindo a intercambialidade com outros projetos que tenham como alvo a análise deste marcador.

PALAVRAS-CHAVE: Migrânea; Cefaleia; Biomarcador; CGRP