DESENHO E OTIMIZAÇÃO DE REAÇÃO DE QUANTIFICAÇÃO DA EXPRESSÃO GÊNICA POR MÉTODO SYBR®GREEN EM SISTEMA DE PCR EM TEMPO REAL (QRT-PCR) PARA O GENE DA INTERLEUCINA 10

INTRODUÇÃO: A interleucina 10 (IL10) é uma citocina com propriedades anti-inflamatórias que inibe a resposta imunológica celular. Na patogênese da COVID-19 ocorre uma “tempestade” de citocinas, cursando com o aumento considerável das concentrações de IL10. Diversos estudos relacionam níveis elevados de citocinas e marcadores inflamatórios durante a gestação ao risco de repercussões psiquiátricas para a prole, tais como depressão, atrasos do neurodesenvolvimento motor e Transtorno do Espectro Autista (TEA). Diante disso, a avaliação e quantificação dos níveis de IL10 no sangue periférico de mulheres gestantes é essencial para verificar os impactos do Sars-CoV-2 sobre os filhos. OBJETIVOS: O objetivo desse estudo é propor o desenho e otimização de primer para a análise da expressão gênica de IL10 pelo método SYBR®Green em mulheres gestantes infectadas pelo COVID-19 durante o período gestacional. MATERIAIS E MÉTODO: Para tanto, foi realizada a identificação da sequência do gene da IL10 e genes constitutivos no banco de dados GenBank do NCBI. Foram selecionados os éxons 5 e 6 que são presentes em todas as variantes do gene. RESULTADOS: De posse dessas informações, foi utilizada a ferramenta PickPrimer para encontrar sequências de primers. As sequências dos primers foram submetidos as ferramentas Blast Nucleotide, para se avaliar a capacidade de identificar a sequência alvo, e ao DINAmelt, a fim de se verificar a formação de dímeros. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Após a síntese, foram realizados testes de qualidade (curva de diluição) e uma análise de 4 amostras de pacientes recrutadas no projeto, sendo observado que os iniciadores desenhados e padronizados neste protocolo são viáveis para análise da expressão gênica de IL10 nestas amostras.

PALAVRAS-CHAVE: Interleucina 10; COVID-19; Sars-Cov2; Gestação; Neurodesenvolvimento