DETECÇÃO MOLECULAR DE ESPÉCIES DE FUSARIUM COM POTENCIAL MICOTOXIGÊNICO EM DIFERENTES FORRAGENS CONSERVADAS

INTRODUÇÃO: Na pecuária brasileira, o uso de culturas forrageiras como o feno, o pré-secado e a silagem tem se tornado cada vez mais comum para minimizar os efeitos da sazonalidade e garantir valores nutricionais consistentes na alimentação dos ruminantes. Essas práticas permitem armazenar os alimentos, proporcionando uma fonte de alimentação de alta qualidade ao longo do ano. No entanto, a produção de silagem e feno pode estar suscetível ao desenvolvimento de microrganismos fúngicos, como os do gênero Fusarium, que podem produzir micotoxinas tóxicas para humanos e animais. Na região sul do país estudos tem identificado a presença de micotoxinas e do gênero Fusarium, no entanto, há uma lacuna de conhecimento acerca das espécies presentes na região leste do paraná. Isso se deve em parte há uma grande dificuldade de identificação precisa com base apenas em métodos morfológicos. OBJETIVOS: Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho foi identificar espécies de Fusarium com potencial micotoxigênico em diferentes forragens conservadas presentes na Fazenda Experimental Gralha Azul (FEGA), através do uso de marcadores morfológicos e detecção molecular pela técnica de PCR. MATERIAIS E MÉTODO: Amostras de feno e silagem foram coletadas e submetidas a um processo de assepsia para reduzir a carga microbiana. Além disso, foram obtidas amostras previamente identificadas de F. graminearum, F. poae, F. sporotrichioides e F. verticillioides de outros grupos de pesquisa, a fim de testar os protocolos de identificação morfológica, extração de DNA e PCR em paralelo. A identificação morfológica foi realizada utilizando diferentes marcadores morfológicos como o meio de cultura Batata Dextrose Ágar, (BDA), Solo ágar (SA), Cloreto de potássio ágar (KCL-Ágar) e Carnation Leaf Agar (CLA). As amostras identificadas foram utilizadas para estabelecimento de câmara úmida com intuito de verificar a viabilidade da extração de DNA e detecção dos fungos por PCR, sem a necessidade prévia de isolamento. Tanto material proveniente de isolamento quanto de feno e silagem foram testados com três primers específicos para F. graminearum, F. poae e F. sporotrichioides. RESULTADOS: Ao final, foi possível identificar as espécies por meio da morfologia e padronizar a extração de DNA, no entanto, com apenas duas espécies de Fusarium foi possível obter resultados positivos quanto a realização da PCR em um primeiro momento, não sendo um resultado reprodutível posteriormente. Os principais fatores observados para isso foram, a contaminação cruzada que ocorreu entre as amostras, a presença de possíveis inibidores de PCR e risco de acondicionamento inadequado dos reagentes. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Portanto, foi possível concluir que maiores cuidados referentes a contaminação devem ser tomados, assim como com o acondicionamento adequado dos reagentes.

PALAVRAS-CHAVE: Fusarium; Silagem; Feno; Identificação morfológica; PCR.