IDENTIFICAÇÃO DE CEPAS SUSPEITAS A PERTENCEREM AO GÊNERO PHYTOBACTER EM AMBIENTE HOSPITALAR

INTRODUÇÃO: Inúmeras correções taxonômicas delineiam o histórico do gênero Phytobacter. Originalmente descrito como uma bactéria endofítica do arroz selvagem (Oryza rufipogon), as cepas inclusas neste gênero encontram-se, atualmente, relacionadas à infecções nosocomiais. Os isolados descritos destacam-se pela capacidade de carrear genes de resistência aos antimicrobianos (ARGs) alcançando relevância clínica significativa. Investiga-se ainda seu potencial de atuação como reservatório e disseminador de ARGs, através da transferência horizontal de genes plasmidiais. Descrições presentes na literatura relacionam as bactérias do gênero com a presença dos seguintes ARGs: blaKPC, blaNDM, blaIMP-6, blaGES-5, blaCTX-M e blaTEM. Todavia, as identificações incorretas deste patógeno ao longo dos séculos, impossibilitaram a plena compreensão de seu impacto clínico direto. Atualmente, repetem-se episódios nos quais a identificação do patógeno mostra-se imprecisa. O uso de testes manuais e automatizados, por vezes, identificam as cepas deste gênero de forma errônea indicando-as como representantes do gênero Pantoea spp., Kluyvera spp., Cronobacter spp. e/ou Leclercia adecarboxylata. OBJETIVOS: Neste contexto, o estudo propôs realizar uma análise filogenética e taxonômica das cepas suspeitas de Phytobacter, de modo a estabelecer uma identificação fidedigna produzindo uma base de dados específica. MATERIAIS E MÉTODO: Para tanto, realizou-se a análise de amostras obtidas de swabs retais de pacientes internados em Unidades de Terapia Intensiva de um Hospital Terciário de Curitiba, PR, bem como de amostras do ambiente hospitalar da mesma instituição. As amostras foram semeadas em ágar cromogênico e MacConkey. As colônias com características morfológicas de interesse foram submetidas a espectrometria de massa no equipamento VITEK® MS – MALDI-TOF. Os espectros gerados foram comparados em uma base de dados fechada, utilizando o sistema Myla® para determinar a identidade taxonômica. As amostras sem identificação ou identificadas como patógenos suspeitos – previamente correlacionadas à equívocos na identificação das cepas do gênero Phytobacter, foram submetidas à extração de DNA para análise da presença do gene nifA, pela técnica de PCR. Na presença deste gene, a cepa foi submetida ao teste manual API20E para avaliação do seu perfil bioquímico. RESULTADOS: O estudo analisou 213 colônias obtidas a partir da semeadura de 68 swabs retais e 32 swabs ambientais. Destas, 22 colônias não apresentaram identificação através do software Myla® e 11 colônias foram identificadas como patógenos suspeitos. Portanto, 33 cepas foram submetidas à técnica de PCR. Até o momento, uma cepa compatível com o gênero Phytobacter foi isolada de ambiente hospitalar e identificada como Pantoea agglomerans na espectrometria de massa. A sequência de investigação da cepa evidenciou a presença do gene nifA e resultados do API20E compatível com Phytobacter. Adota-se como perspectiva futura para os isolados bioquimicamente semelhantes ao gênero Phytobacter spp. o posterior sequenciamento de genoma completo a ser realizado conforme disponibilidade do LACEN-PR. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Observa-se, desse modo, a persistência dos impasses na identificação deste gênero, apesar dos avanços tecnológicos na identificação microbiana. Assim, a ampliação no banco de dados referente ao gênero mostra-se relevante clinicamente, de modo a otimizar a identificação deste gênero, visto tratar-se um potencial patógeno humano carreador e disseminador de genes de resistência aos antimicrobianos.

PALAVRAS-CHAVE: Phytobacter diazotrophicus; Phytobacter ursingii; Enterobactérias; Resistência aos antimicrobianos.