AVALIAÇÃO DA ESTABILIDADE GENÉTICA DE DIFERENTES SUBPOPULAÇÕES DE CÉLULAS-TRONCO MENSENQUIMAIS DE POLPA DE DENTE

INTRODUÇÃO: As células-tronco mesenquimais (CTM) são células-tronco adultas com potencial de autorrenovação, reparação tecidual e diferenciação em vários tecidos, tornando-as promissoras na aplicação clínica. As CTM podem ser obtidas de vários tecidos, como as derivadas da polpa dentária (DPSC). Elas se destacam pela boa expansão in vitro, além de compartilhar a origem embrionária com as células neuronais. Porém, questões de biossegurança e heterogeneidade precisam ser elucidadas, especialmente a instabilidade genética que pode influenciar características morfológicas e funcionais. OBJETIVOS: Este estudo aborda lacunas sobre a estabilidade genética das DPSC e suas subpopulações, essencial para sua aplicação clínica. MATERIAIS E MÉTODO: Este projeto tem aprovação do Comitê de Ética em Pesquisa (parecer 5.409.680). As amostras foram coletadas de um paciente submetido a extração dentária por razões clínicas. A polpa dentária foi dividida de acordo com a sua localização, sendo coroa (DPSC-C), raiz (DPSC-R) e polpa inteira (DPSC-I). As DPSC foram isoladas por digestão enzimática e cultivadas até a passagem quatro. As amostras foram submetidas à caracterização por imunofenotipagem, seguindo as diretrizes da Sociedade Internacional de Terapia Celular e Gênica (ISCT). Para o ensaio de proliferação foi utilizado o kit Click-iT Plus de acordo com as instruções do fabricante. Na citogenética, as amostras foram submetidas a procedimentos para obter metáfases utilizando interruptor mitótico. As células foram fixadas, armazenadas e preparadas em lâminas para Bandeamento G. As metáfases foram localizadas nas lâminas, capturadas e analisadas usando um sistema de cariotipagem. RESULTADOS: Foi coletada uma amostra de terceiro molar para isolar as DPSC e suas subpopulações, com eficiência de 100% e ausência de contaminação durante o cultivo. Todas as amostras apresentaram morfologia fibroblastóide e aderência ao plástico, características das CTM. As DPSC-C exibiram colônias com morfologia não usual para CTM. A análise imunofenotípica das amostras DPSC-I e DPSC-R demonstrou expressão positiva para CD29, CD73, CD90 e CD105, e expressão reduzida para CD14, CD19, CD34, CD45 e HLA-DR. As DPSC-C apresentaram expressão maior que a esperada para o marcador CD14 além de uma menor taxa de proliferação quando comparada com as DPSC-R e DPSC-I. Nenhuma alteração cromossômica clonal foi observada nas DPSC e suas subpopulações. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Foi coletada uma amostra de terceiro molar para isolar as DPSC e suas subpopulações, com eficiência de 100% e ausência de contaminação durante o cultivo. As amostras DPSC-I e DPSC-R apresentaram morfologia fibroblastóide e aderência ao plástico, características das CTM. As DPSC-C exibiram colônias com morfologia não usual para CTM. A análise imunofenotípica das amostras DPSC-I e DPSC-R demonstrou expressão positiva para CD29, CD73, CD90 e CD105, e expressão reduzida para CD14, CD19, CD34, CD45 e HLA-DR. As DPSC-C apresentaram expressão maior que a esperada para o marcador CD14 além de uma menor taxa de proliferação quando comparada com as DPSC-R e DPSC-I. Nenhuma alteração cromossômica clonal foi observada nas DPSC e suas subpopulações.

PALAVRAS-CHAVE: Citogenética; Expansão celular; Cariótipo; Proliferação.