SINCRONIZAÇÃO MITÓTICA EM CÉLULAS-TRONCO DA POLPA DENTÁRIA PARA ESTUDOS DE BIOLOGIA CROMOSSÔMICA

INTRODUÇÃO: A sincronização mitótica se baseia em um conjunto de técnicas que permitem a progressão coordenada de células pelas fases do ciclo celular. Ela é uma metodologia fundamental para a investigação exploratória dos mecanismos envolvidos na regulação do ciclo celular e na segregação cromossômica adequada, por meio de análises citogenéticas, transcriptômicas e proteômicas em resoluçãotemporal. Nos modelos humanos, a sincronização mitótica pode viabilizar estudos acerca da dinamicidade da condensação e segregação cromossômica, bem como investigações de fatores relacionados à manutenção da estabilidade genômica durante a divisão celular. Células-tronco da polpa dentária (DPSC) são uma fonte promissora de células-tronco mesenquimais (CTM), caracterizadas como um modelo primário humano com uma alta taxa proliferativa. Elas se enquadram como uma alternativa mais fidedigna à fisiologia humana em relação às linhagens transformadas, comumente utilizadas para estudos de ciclo celular. Apesar deste potencial, protocolos de sincronização otimizados para DPSC são escassos. A seleção de técnicas reprodutíveis de sincronização mitótica nestas células possibilitará avanços significativos em biologia cromossômica e em estudos ômicos fase-específicos em sistemas primários. OBJETIVOS: Avaliar a eficiência da sincronização mitótica em DPSCs utilizando privação de soro bovino fetal (SBF) e analisar o enriquecimento de células em diferentes fases do ciclo celular. MATERIAIS E MÉTODO: O projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa (CAAE: 67807123.8.0000.0020). Para o ensaio de sincronização, uma amostra de DPSC foi submetida à privação de fatores de crescimento por 28 horas. Em seguida, foi readicionado meio de cultivo com 15% de SBF em diferentes tempos, conforme o horário em que as células foram fixadas. Os tempos selecionados foram 26, 28, 30, 32, 34 e 36 horas. Após o tratamento, as células foram processadas utilizando o kit Click-iT™ EdU, fixadas, marcadas com 7-AAD e analisadas por citometria de fluxo. RESULTADOS: Durante o cultivo, as DPSCs apresentaram morfologia fibroblastóide e aderência ao plástico, características das CTMs. No ensaio de sincronização, foi possível observar por microscopia de campo-claro a progressão das DPSCs através do ciclo celular. A análise revelou que os picos de células em fase G0/G1, S e G2/M ocorreram 36, 26 e 32 horas após readição de SBF, respectivamente. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Os resultados obtidos sugerem que as DPSCs reentraram no ciclo celular após reintrodução dos fatores de crescimento, dando início à síntese de novo de DNA (fase S – 26h), progredindo para a divisão mitótica (G2/M – 32h) e retornando ao seu estado basal (G0/G1 – 36h). Isto indica que o período ideal para obtenção de metáfases é cerca de 32 horas após readição de SBF. Contudo, são necessárias investigações adicionais que explorem diferentes técnicas de sincronização e utilizem CTMs provenientes de outras fontes. Desta forma, será possível otimizar protocolos de sincronização mitótica para estudos de biologia cromossômica e análises ômicas de células primárias humanas em diferentes fases do ciclo celular.

PALAVRAS-CHAVE: Ciclo celular; Mitose; Sincronização; Célula-tronco mesenquimal; Citometria de fluxo.