CARACTERIZAÇÃO DE UM PRODUTO DE TERAPIA AVANÇADA BASEADO EM CÉLULAS-TRONCO MESENQUIMAIS DA MEDULA ÓSSEA

INTRODUÇÃO: As células-tronco mesenquimais (CTMs) são promissoras para o desenvolvimento de produtos de terapia avançadas (PTAs). Para uso clínico no Brasil, é necessário que atendam à critérios estabelecidos pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), incluindo testes de controle de qualidade para anormalidades cromossômicas, esterilidade das amostras e dos cultivos celulares, detecção de bactérias e fungos, endotoxinas e micoplasma. É necessário determinar a viabilidade da amostra e avaliar o perfil imunofenotípico para caracterizar a população de CTMs, além de quantificar moléculas relacionadas à imunogenicidade e à coagulação, fundamentais para a segurança da terapia celular. OBJETIVOS: Caracterizar um produto de terapia avançada baseado em células-tronco mesenquimais derivadas da medula óssea humana (CTM-MO). MATERIAIS E MÉTODO: O projeto teve aprovação no Comitê de Ética em Pesquisa (CEP) da PUCPR (CAAE: 68585123.1.0000.0020). Cinco amostras de medula óssea foram processadas no Biobanco do Centro de Tecnologia Celular (CTC/PUCPR). As amostras foram descongeladas, expandidas e avaliadas por citometria de fluxo para: Determinação da viabilidade celular pela incorporação do corante vital 7-AAD e pela expressão do marcador de apoptose Anexina V; Caracterização das CTMs pela expressão dos marcadores de superfície CD14, CD19, CD34, CD45, HLA-DR, CD29, CD73, CD90 e CD105; Quantificação do fator tecidual pró-coagulante CD142; Análise da imunogenicidade pela expressão dos marcadores HLA-ABC, HLA-DR, CD40, CD80 e CD86. Além disso, as amostras foram induzidas às diferenciações osteogênica, adipogênica e condrogênica in vitro, utilizando meio comercial, por 21 dias. Após esse período, as células foram fixadas e coradas de acordo com os seus respectivos protocolos para a visualização em microscópio óptico e análise dos resultados. RESULTADOS: As amostras apresentaram viabilidade média de 97,8%. A caracterização celular indicou a expressão média dos marcadores positivos (CD29, CD73, CD90 e CD105) acima de 95% e negativos (CD14, CD19, CD34, CD45, HLA-DR) abaixo de 2%. A média de porcentagem do fator tecidual pró-coagulante (CD142) foi de 3,69% e dos marcadores de imunogenicidade foi abaixo de 2% (CD40, CD80 e CD86) e 98,4% (HLA-ABC). As amostras cultivadas com meios indutores apresentaram habilidade de diferenciação em osteoblastos, adipócitos e condrócitos. Na diferenciação osteogênica foi possível observar a formação dos cristais de cálcio, na adipogênica, as células apresentaram vacúolos lipídicos e na condrogênica, foi possível identificar a matriz rica em proteoglicanos, com a formação de lacunas ao redor dos condrócitos jovens. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Os testes de controle de qualidade foram fundamentais para a caracterização e qualificação do PTA baseado em CTM-MO, demonstrando seu potencial uso terapêutico.

PALAVRAS-CHAVE: 1. Células-tronco mesenquimais; 2. Produto de terapia avançada; 3. Caracterização celular; 4. Fator tecidual pró-coagulante; 5. Diferenciação celular