VALIDAÇÃO DA ASSOCIAÇÃO DE VARIANTES DOS GENES IL1RL1, CUBN E PRKN COM SUSCEPTIBILIDADE DO HOSPEDEIRO À HANSENÍASE

INTRODUÇÃO: A hanseníase, anteriormente denominada “lepra”, é uma doença crônica infectocontagiosa causada pelo M. leprae, que afeta nervos periféricos e macrófagos da pele. Embora seja uma doença que acomete a humanidade desde seus primórdios, ainda é considerada uma doença tropical negligenciada, podendo causar deformidades e incapacidades físicas permanentes em caso de detecção e diagnóstico tardio. É notório o papel da genética do hospedeiro no desenvolvimento dos fenótipos da doença, e com o avanço das técnicas moleculares, diversos genes foram identificados e associados com a susceptibilidade à hanseníase. Para validar os sinais de associações encontrados previamente são necessários estudos independentes, com diferentes amostras populacionais e com backgrounds genéticos distintos. OBJETIVOS: Avançar no entendimento do papel da genética do hospedeiro na susceptibilidade à hanseníase através da validação da associação de variantes dos genes CUBN (rs1801224), IL1RL1 (rs13001714) e PRKN (rs1801582). MATERIAIS E MÉTODO: Para a criação do protocolo de sequenciamento in-house foi realizada a padronização dos primers (desenhados para cobrir as variantes de interesse) através da PCR singleplex e, posteriormente, pela PCR multiplex, a fim de adicionar os primers adaptadores. O sequenciamento NGS foi implementado na plataforma Illumina MiSeq, utilizando 300 ciclos e cobertura total de 20x. A análise dos dados foi feita por eletroforese em gel de agarose 2% para avaliação do desempenho dos primers; e pela aplicação do Phred score para avaliação da qualidade da chamada de bases do sequenciamento. RESULTADOS: Os primers desenhados para dois dos três genes alvos demonstraram amplicons conforme desejado, porém foi necessário o redesenho de primers do gene IL1RL1 para obter produtos de PCR sem dímeros. Após os testes de sequenciamento foram geradas 859.212 reads e pôde-se observar o aumento gradual do valor de Phred; indicando melhorias no protocolo experimental. Devido à atrasos na etapa de padronização e as dificuldades na geração das sequências, o resultado obtido foi limitado à análise da qualidade do sequenciamento. Em conjunto, os dados indicam que o protocolo desenvolvido é promissor, mas que necessita aprimoramento. Serão necessários novos estudos para a geração dos dados brutos completos e finalmente, realizar a análise de associação entre as variantes genéticas e a susceptibilidade à hanseníase. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Com o avanço das técnicas da biologia molecular é possível conduzir cada vez mais pesquisas em genética epidemiológica. O desenvolvimento e a validação de um protocolo in-house para sequenciamento são de grande interesse para a comunidade científica, pois tornará essa tecnologia mais acessível. Por fim, destaca-se a necessidade contínua de elucidar a relação entre a hanseníase e a susceptibilidade genética do hospedeiro à essa doença.

PALAVRAS-CHAVE: 1. Genética da hanseníase; 2. Validação de variantes 3. Análise de associação; 4. Sequenciamento NGS.