VALIDAÇÃO DE PRIMERS E ANÁLISES DE EXPRESSÃO DE GENES EM MERISTEMAS DE ARAUCARIA ANGUSTIFOLIA

INTRODUÇÃO: A Araucaria angustifolia, popularmente conhecida como pinheiro-do-paraná, é uma espécie de grande relevância ecológica e econômica, porém encontra-se em situação crítica de extinção. Embora a enxertia dessa espécie se mostre promissora para a produção precoce de pinhão, ela ainda enfrenta importantes desafios. O principal entrave está relacionado ao crescimento plagiotrópico (horizontal) dos ramos resultantes de enxertos laterais, o que inviabiliza o uso da madeira proveniente dessas árvores. A exploração de meristemas apicais, responsáveis pelo crescimento ortotrópico (vertical), é limitada devido à sua baixa disponibilidade e à complexidade técnica envolvida em seu uso. A compreensão das diferenças de expressão gênica entre os meristemas apicais e laterais é fundamental para o desenvolvimento de métodos que permitam reverter o crescimento plagiotrópico, o que poderia otimizar tanto a produção de pinhão quanto o aproveitamento da madeira. OBJETIVOS: Este estudo teve como objetivo estudar a expressão gênica nos meristemas apicais e laterais desta espécie, com a finalidade de desenvolver técnicas para a regeneração de plantas com crescimento ortotrópico, essencial para a produção de madeira e pinhões. Devido à ausência de dados genômicos disponíveis para a araucária, não foi possível desenvolver primers específicos para a espécie. Assim, optou-se por utilizar primers descritos na literatura para outras espécies florestais. Para MATERIAIS E MÉTODO: Para tanto, foram extraídos DNA de Araucaria angustifolia e Pinus taeda, e testados com 14 pares de primers para genes expressos em meristemas de espécies florestais. Posteriormente, foi extraído o RNA de massas embriogênicas de Pinus empregando o RNeasy® Plant Mini Kit (QIAGEN), o cDNA foi sintetizado utilizando o Kit SuperScript™ III First Strand (Invitrogen), e realizou-se a PCR com os primers que haviam amplificado o DNA de Pinus — KN3, UBI e SERK1. RESULTADOS: Os resultados mostraram que os primers KN3 e UBI amplificaram eficientemente o DNA de Pinus, mas não o de Araucaria, indicando a ausência de regiões complementares no genoma de Araucaria. A extração de RNA e a síntese de cDNA foram bem-sucedidas para as massas embriogênicas de Pinus; no entanto, o primer KN3 não amplificou o cDNA, sugerindo que o gene correspondente não estava expresso nas amostras analisadas. CONSIDERAÇÕES FINAIS: A principal conclusão deste estudo é que os primers disponíveis na literatura para outras espécies não se mostraram adequados para estudos em Araucaria angustifolia. Entretanto, os genes PpUBI e SERK1 demonstraram ser promissores para estudos futuros, sendo o primeiro útil como gene normalizador e o segundo relevante para pesquisas de embriogênese somática em Pinus. Embora tais resultados não sejam diretos deste trabalho, a pesquisa reforça a necessidade de desenvolver novos primers ou adaptar abordagens que possam contornarr as dificuldades na disponibilidade de dados genômicos de A. angustifolia.

PALAVRAS-CHAVE: Araucaria angustifolia; expressão gênica; ortotropia; meristema; embriogênese somática