DETERMINAÇÃO DO POTENCIAL TUMORIGÊNICO DAS CÉLULAS ESTROMAIS MESENQUIMAIS DA MEDULA ÓSSEA

INTRODUÇÃO: As células estromais mesenquimais derivadas da medula óssea (CEM-MO) têm sido utilizadas na medicina regenerativa devido ao seu potencial anti-inflamatório e de regeneração tecidual. Estas células são utilizadas no desenvolvimento de Produtos de Terapia Avançada (PTA) e de acordo com a legislação vigente (RDC 508/2021 – ANVISA) há a necessidade da realização de testes de controle de qualidade para garantir a segurança do PTA que será utilizado no tratamento dos pacientes que participam dos ensaios clínicos. Durante a produção de um PTA as células são submetidas a uma extensa manipulação, o que pode causar instabilidades genéticas nas CEM-MO e aumentar seu potencial tumorigênico. Este potencial pode ser avaliado pelo ensaio de formação de colônias em soft ágar e no ensaio em microplacas CytoSelect™ que se baseiam na habilidade das células com potencial tumorigênico de crescerem independente de ancoragem e formarem colônias. OBJETIVOS: Avaliar o potencial tumorigênico das células estromais mesenquimais da medula óssea por meio da avaliação do crescimento celular independente de ancoragem. MATERIAIS E MÉTODO: O estudo teve aprovação do Comite de Ética em Pesquisa (CAEE: 68585123.1.0000.0020). Foram utilizadas cinco amostras de CEM-MO e células He-La, que apresentam potencial tumorigênico, como controle positivo para ambos os protocolos. O ensaio padrão de formação de colônias em soft ágar consistiu na utilização de duas concentrações de ágar (1% e 0,6%) onde 20.000 CEM-MO e células HeLa foram semeadas em placa de 6 poços, em duplicata técnica e incubadas em estufa com 5% de CO2, a 37°C, por 21 dias. O ensaio em microplacas CytoSelect™, é um método quantitativo e constituiu na utilização de duas camadas de ágar 1,2% em uma placa de 96 poços, com três concentrações de células, em triplicata técnica, durante sete dias para a análise quantitativa de colônias por meio da avaliação da unidade relativa de fluorescência (RFU). RESULTADOS: No ensaio padrão em soft ágar e no ensaio em microplacas CytoSelect™, observou-se que as CEM-MO cresceram de forma isolada e não formaram colônias, enquanto as células He-La, por serem tumorigênicas, cresceram independente de ancoragem, formando colônias. As análises estatísticas do ensaio em microplacas, mostrou diferença estatística no crescimento celular entre as CEM-MO e as células He-La para todas as amostras testadas. CONSIDERAÇÕES FINAIS: Pode-se concluir que ambos os protocolos são eficazes para determinar o potencial tumorigênico de CEM-MO por meio da avalição do crescimento celular independe de ancoragem, garantindo assim a qualidade e segurança das células.

PALAVRAS-CHAVE: 1. Produto de terapia avançada; 2. Controle de qualidade; 3. Segurança; 4. Eficácia; 5 Instabilidade genética.