INTRODUÇÃO: O tratamento endodôntico é um dos principais meios de devolver a função do sistema estomatognático. Entretanto, existe a probabilidade de falhas, principalmente relacionadas com possíveis infecções bacterianas, que podem ser ocasionadas devido ao indevido preparo dos canais, obturações e/ou restaurações. A vancomicina é um antibiótico pertencente ao grupo dos glicopeptídeos, atuando como bactericida nos casos de bacilos gram-positivos. Ela inibe a síntese da parede celular durante sua proliferação ocasionado uma quebra osmótica. Desta forma, torna-se uma alternativa no tratamento de infecções graves. Já o hidróxido de cálcio, puro ou associado a outros medicamentos, caracteriza-se como o material de maior utilização quando utilizado de forma intracanal. – OBJETIVOS: Avaliar o efeito antimicrobiano do hidróxido de cálcio e da vancomicina frente ao Enterococcus Faecalis. – MATERIAIS E MÉTODO: Foram realizados dois testes iniciais para estabelecer a concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) da vancomicina e do hidróxido de cálcio. – RESULTADOS: Foram realizados dois testes iniciais para estabelecer a concentração inibitória mínima e a concentração bactericida mínima da vancomicina e do hidróxido de cálcio. Os resultados demonstraram a concentração de cada droga frente ao Enteroccus Faecalis, sendo para CIM, vancomicina 1mg/L e hidróxido de cálcio 0,5mg/ml e CBM, vancomicina 32mg/L e 4mg/ml. Ambos os fármacos apresentaram atividade antimicrobiana frente ao Enterococcus Faecalis. – CONSIDERAÇÕES FINAIS: Esses resultados sugerem que o hidróxido de cálcio devido sua alcalinidade favorece a inibição bacteriana e lise bacteriana em baixas concentrações. Para etapa futura, na associação entre vancomicina e hidróxido de cálcio, o fator pH proveniente da alcalinidade do hidróxido de cálcio será um ponto importante a ser avaliado, pois se desconhece sua ação nas propriedades da vancomicina.