INTRODUÇÃO: O neuroblastoma é o tumor sólido mais comum em crianças entre 1 e 4 anos, sendo responsável por 15% das mortes causadas por câncer nesta faixa etária. Por ser uma doença heterogênea, os tumores podem apresentar desde regressão espontânea nos casos mais brandos, até resistência aos tratamentos nos casos mais graves. Ganhos no braço longo do cromossomo 17 estão entre as aberrações mais comuns no neuroblastoma, assim como em outros tumores, e a expressão do gene BIRC5, com localização em 17q25.3, está relacionada à resistência ao tratamento quimioterápico. O gene BIRC5 é responsável pela codificação da proteína survivina, que faz parte da família dos inibidores de apoptose (IAPs). A sua localização celular é importante para as neoplasias, pois quando presente no citosol é apontado como um marcador de mau prognóstico. Estas características são o que tornam a survivina um potencial alvo terapêutico no tratamento do câncer, aumentando a necessidade de identificação de bons modelos celulares para o estudo in vitro de seus mecanismos de ação. – OBJETIVOS: O presente projeto tem o objetivo de determinar a linhagem imortalizada ideal para o estudo in vitro de survivina no neuroblastoma humano e relacionar suas características com seu perfil de resistência à agentes quimioterápicos. – MATERIAIS E MÉTODO: Células das linhagens CHLA-15, CHLA-20, SK-N-BE(1), SK-N-BE(2), Be(2)-M17, SK-N-SH e SH-SY5Y estão sendo submetidas à análise de cariótipo por bandeamento G; FISH para determinação do status do braço longo do cromossomo 17; análise de expressão dos genes BIRC5 e MYCN por RT-qPCR; análise de expressão proteica da survivina por Western blot e sua localização celular por microscopia confocal. Na etapa final do projeto, as células serão tratadas com diferentes agentes quimioterápicos para avaliação dos perfis de resistência das linhagens através de teste de viabilidade celular. – RESULTADOS: A utilização de 30uL do interruptor mitótico (Karyo MAX® ColcemidTM) durante 30 minutos foi suficiente para permitir a visualização dos cromossomos de forma satisfatória nas linhagens SH-SY5Y e SK-N-Be(1). Para a determinação da expressão gênica basal das linhagens SK-N-Be(1), SK-N-Be(1), CHLA-15 e CHLA-20, foi realizada a extração de RNA e formação de DNA complementar, com RT-qPCR utilizando quantidades diferentes de amostra. Foi observado então que as amostras devem ser diluídas em 3X para um resultado satisfatório de amplificação. – CONSIDERAÇÕES FINAIS: O projeto está em andamento e segue o cronograma previsto no projeto. Já foram realizados ensaios preliminares e os diversos protocolos experimentais estão em etapa de otimização. Até o momento, os resultados parciais obtidos não permitem a conclusão das etapas propostas, mas não existem atrasos e todos os reagentes já foram obtidos. Desta forma, espera-se que o projeto será concluido no prazo estabelecido.
